交通肇事罪的主体包括从事交通运输的人员，及直接操纵交通工具的驾驶人员、直接操纵交通设施的业务人员、直接领导指挥交通运输活动的领导指挥人员、交通运输安全的管理人员。还包括非交通运输人员，即无合法手续或暂时无合法手续从事交通运输的人员。非机动交通工具运输人员和行人违反交通管理法规，造成重大交通事故的，构成本罪。
从事飞机运输的人员（包括空勤人员和地勤人员）违反规章制度造成重大飞行事故，和从事铁路运输的铁道职工违反规章制度造成铁路运营安全事故的，分别受“重大飞行事故罪”和“铁路运营安全事故”的调整，不受本罪调整。但是非航空人员、铁路职工造成重大飞行事故和铁路运营安全事故的受本罪调整。
也就是说，行人、机动车辆驾驶人、交通设施的业务人员、直接领导指挥交通运输活动的领导指挥人员、交通运输安全的管理人员、非交通运输人员、非航空人员、铁路职工造成重大飞行事故和铁路运营安全事故都可能构成交通肇事罪。